Culture avancée de plantes autofleurissantes

Test des cannabinoïdes

Nous avons commencé notre journée par une conversation avec l'expert en chef de l'équipe de Dinafem arrivé en 2011. Le Dr Ananda, technicien de laboratoire spécialisé dans le breeding de plantes, a une longue expérience dans la culture du cannabis qui a commencé dans son adolescence. Grâce à son aide, les breeders de Dinafem bénéficient d'une grande quantité d'informations quand il faut décider de faire des croisements. Il vaut la peine de noter que ces locaux de culture ne sont jamais ouverts au public ni aux visiteurs. Seul Soft Secrets a été autorisé à les visiter car Dinafem leur fait entièrement confiance. Pour le prouver, même si le Dr. Ananda n'a jamais reçu de visiteurs dans son laboratoire auparavant, il nous a accueilli avec les résultats de tests menés sur des mâles et nous a décrit sa méthode de travail étape par étape.

Dans le cas décrit ici, le test est conçu pour la sélection des mâles qui vont être utilisés pour le breeding. Le processus a commencé avec des échantillons de boutures qui ont été séchées à une température de 50° C pendant 12 heures. Seules quelques poignées de fleurs sont récoltées sans les tiges et les feuilles. Ensuite, on enlève les filaments qui soutiennent les sacs de pollen (anthères). Elles sont ensuite pesées avec une balance de très haute précision, mesurant jusqu'à 4 décimales. On met du solvant dans une fiole avec un échantillon-étalon (pour le contrôle) qui sera utilisé comme référence par le chromatographe qui va analyser la teneur en cannabinoïdes.

La solution est d'abord exposée à des ultrasons – qui séparent et diluent les quelques trichomes qui se développent à l'intérieur des anthères des fleurs mâles. Ensuite, elle est centrifugée afin de séparer la matière organique qui va rester au fond du tube Eppendorf car elle pourrait endommager la colonne du chromatographe. 500 µL de solution contenant des cannabinoïdes sans matière organique sont chauffés dans une chambre à 120° C. Le processus de décarboxylation transforme la forme acide (THCA) en forme active (THC) en supprimant le groupe d'acide carboxylique (-COOH) de la molécule de THCA (acide tétrahydrocannabinolique) ce qui produit un effet semblable à la combustion ou la vaporisation du cannabis.

Après l'évaporation de la solution, il reste un résidu résineux sur les parois de la fiole qui sera dilué avec 1,5 ml d'éthanol pur. Cette solution est ensuite placée dans le chromatographe gazeux. Le premier pic correspond au contrôle de la solution. La machine va ensuite mesurer les zones restantes en comparant leur surface avec celles des divers pics de cannabinoïdes transcrits sur un graphique ultérieurement. Même si le chromatographe fait le graphique automatiquement, de petites erreurs sont possibles, c'est pourquoi l'identification des pics est faite manuellement. Grâce à un travail rigoureux qui consiste à d'abord introduire des échantillons standard de cannabinoïdes, l'équipe d'ingénieurs de Dinafem est capable d'identifier avec précision tous les cannabinoïdes contenus dans un échantillon.

Sélection des mâles

Avec les résultats de ces tests, nous sommes passés dans le local où sont conservés les mâles dans des tentes de culture. Il vaut la peine de décrire toutes les précautions qui sont prises pour éviter toutes pollinisations croisées. Le personnel porte des combinaisons blanches qui recouvrent tout le corps afin d'empêcher que du pollen ne soit piégé dans les vêtements. L'air du local est extrait par un système filtrant puissant pour que, quand on ouvre une porte, l'air entre toujours par la porte et sorte par le ventilateur. Il est ainsi quasi impossible que du pollen s'échappe. Le local contient des tentes séparées pour chaque type de mâles. Et comme si ça ne suffisait pas, de l'eau est pulvérisée dans tout l'environnement durant tout le processus afin d'augmenter le taux d'humidité et éliminer tout grain de pollen volatile.

A l'intérieur des tentes, tous les facteurs sont contrôlés et quelques mâles éliminés: une structure faible, des signes visibles d'hermaphrodisme et une faible teneur en cannabinoïdes sont les critères principaux de ce tri. Concernant la structure, les conditions optimales sont estimées comme atteintes quand les plantes sont maintenues à l'intérieur, avec des fertilisations généreuses, une lumière abondante et une température correcte, ce qui normalement, produit une croissance luxuriante avec de longs entrenoeuds. Cependant, il peut arriver que quelques plantes aient des bonnes proportions dans ces conditions indoors mais soient rabougries dans des conditions outoors ordinaires. La plupart des graines vont germer dans tous les cas même dans les pires conditions outdoors car les plantes qui poussent abondamment à l'intérieur restent correctes à l'extérieur.

Différentes structures de plantes sont prises en considération quand des échantillons sont emmenés au laboratoire et, parmi toutes les plantes, on prend des individus avec des proportions moyennes pour que les comparaisons soient les plus objectives possibles. Tous les mâles qui ont de petites fleurs femelles sont éliminés afin de supprimer tout signe d'hermaphrodisme du pôle génétique. Mais le personnel avec lequel nous avons parlé nous a affirmé que la présence d'hermaphrodite est rare parmi les femelles de variétés autofleurissantes, mais effectivement plus courante parmi les mâles. La quantité de pollen libérée par des plantes mâles autofleurissantes est incroyablement élevée et elles nécessitent pour cela beaucoup de précautions.

Dès qu'un mâle est coupé et déplacé, il est placé dans un sac en plastique et l'environnement est copieusement arrosé d'eau pour stopper la libération du pollen. A la fin, seul trois mâles sont gardés dans chaque tente. Tous ont une structure bien ramifiée et ne présentent aucun risque d'intersexualité. La toute dernière étape consiste à sélectionner le seul mâle qui va rester. Pour cela, on va vérifier celui qui a un taux élevé en THC et faible en CBD après quoi, il sera inspecté de près pour être sûr qu'il n'a aucun trait d'hermaphrodisme. Pollinisation et conclusions Avec la plus grande précaution, le mâle sélectionné est introduit dans la tente correspondante de femelles qui a été placée dans un autre local voisins pour éviter une pollinisation aléatoire.

Le mâle est secoué au dessus des femelles et laissé à l'intérieur de la tente pendant quelques jours. Quand ses sacs produisent plus de pollen, il est utilisé pour d'autres pollinisations. Avec des variétés autofleurissantes, il est impossible de garder seulement les plantes mères des individus sélectionnés. Une sélection adaptée est donc la clé d'un bon breeding. Dans cet article, nous avons illustré quelques-uns des facteurs majeurs pour Dinafem dans son processus de breeding: une structure correcte, une sexualité pure, un taux élevé de THC et faible de CBD, obtenus par la sélection rigoureuse des mâles. Tout cela contribue à la bonne réputation de cette banque de semences, saison après saison. Son expérience en la matière est fortement appréciée par le public et d'autres breeders qui souhaitent des plantes autofleurissantes de grande qualité.