Testowanie i hodowla CBD 2.0
Odwiedziliśmy Dinafem i rozmawialiśmy z dr. Ananda, który opowiedział nam o tym, jak wykorzystuje testy laboratoryjne do opracowania szczepów CBD.
Laboratorium Dinafem powstało 4 lata temu. Wszystko zaczęło się w październiku 2012 roku od zespołu specjalistów pracujących wspólnie z Renovatio i Ai Laket. Pomieszczenie na laboratorium było pierwotnie przeznaczone do projektu minimalizacji ryzyka, oferującego analizy próbek dostarczanych przez kluby zainteresowane informacją zwrotną o zawartości kannabinoidów.
[caption id="attachment_3056" align="alignnone" width="500"]
Selekcja rodziców.[/caption]
Dinafem aktywnie wspierał ten projekt i opracował badania służące hodowli szczepów automatycznie kwitnących i dodatkowe testy tych szczepów. Zaczynano od podstaw, ponieważ wówczas stosowana metoda analityczna była błędna i trzeba było zaprojektować i zatwierdzić swój własny sposób. Wymagania wzrosły od pierwszych dni testów, ale udało się osiągnąć niezawodny stopień dokładności badania. Jak dr Ananda wyjaśnił: "Kiedy dostajemy nowe instrumenty badawcze, wbudowane oprogramowanie jest nieco ślepe, co oznacza, że trzeba dodać właściwe, zatwierdzone metody przetwarzania danych".
Rośliny o cechach hermafrodyty są odrzucane.[/caption]
Poza poziomami kannabinoidów testy przyczyniają się do lepszego zrozumienia genetyki. Na przykład dystrybucja chemotypów danego szczepu pomaga przy określeniu wyjściowego typu materiału, to znaczy czy jest to F1, F2 lub F3.
Innym aspektem, który warto podkreślić, jest znaczenie metody uprawowej i hodowcy, jako że można uzyskać z tej samej rośliny różne poziomy kannabinoidów. W szczególności można wykazać, że w kontrolowanym środowisku klimatycznym o wyższym natężeniu światła hodowca może uzyskać obfite plony i wyższe poziomy żywicy i kannabinoidów. Podobnie w zależności od zdolności rolnika poziom CBD może wzrastać lub zmniejszać się w danym zakresie.
Szczep bogaty w CBD należący do grupy czystych Indica.[/caption]
Po uzyskaniu całkowitej pewności co do testowania, hodowcy szybko ruszyli z projektem CBD, gdzie trzeba korzystać z możliwie najlepszych instrumentów, na dodatek intensywnie przez okres kilku miesięcy. Spędzono nawet dwa pełne tygodnie na ciągłych testach przy wyborze pierwszych rodziców ogromnych upraw. Próbki były przygotowywane w ciągu dnia, podczas gdy maszyna analizowała je w porze nocnej za pomocą zautomatyzowanego procesora próbek. Stwierdzono, że pomimo ograniczonego zestawu instrumentów były one wystarczająco skuteczne, aby spełnić wymagania Dinafem.
Jak dr Kush to ujął: "Istnieją banki nasion wykorzystujące Dinafemowy OG Kush Autoflowering do produkcji dobrej jakości automatów, więc korzystają z naszej pracy. Ale jeśli chodzi o CBD, jest długa droga przed nami i nie ma drogi na skróty. Doskonałość można osiągnąć jedynie poprzez badania i długie lata ciężkiej pracy, z pokolenia na pokolenie". Przed rozpoczęciem projektu znano teoretyczne podstawy hodowli - zwłaszcza hodowli CBD. Ale przemieszczano się przez różne etapy, od teorii do praktyki, i wykazano niezawodnym narzędziem chromatografu, że osiągnięto pożądane rezultaty. Ponieważ pracowano tylko z rodzajami chemotypów potrzebnymi w tym projekcie, można było przeprowadzić kilka selekcji i odrzucić duże liczby osobników, zaś używać tylko tych najlepszych. Pierwszym zadaniem było oddzielenie poszczególnych rodzajów chemotypów roślin o dominującym CBD, z różnymi stężeniami u różnych osobników. W czasie tego procesu wybrano rośliny o najwyższych poziomach kannabinoidów. Według powszechnej wiedzy badania są oczywiście tylko jedną stroną medalu; czasami test laboratoryjny odnajdzie chemotypy, które są pozornie bardzo podobne, ale różnice pojawiają się tylko w uprawie. Z tego samego powodu liczą się dane analityczne wraz z czynnikiem ludzkim; praca hodowców i ekspertów jest tym, na co ostatecznie Dinafem kładzie szczególny akcent.
Po przeanalizowaniu pełnej populacji następnym krokiem było rozrysowanie diagramów ukazujących dystrybucję. Jest to szczególnie przydatne w celu rozpoczęcia pracy z konkretnymi materiałami genetycznymi i ocenie, czy rośliny zachowują się zgodnie z oczekiwaniami. Normalnie to odwzorowanie jest wykorzystywane do usunięcia wszelkich grup roślin, które nie pasują do projektu. Obecnie ten krok staje się zbędny, ponieważ personel Dinafem posiada doskonałą wiedzę o materiałach genetycznych, z którymi pracuje i wie z góry, co będzie potrzebne w krzyżówce, aby bezpośrednio zmierzać do celu.
[caption id="attachment_3059" align="alignnone" width="500"]
Numerowanie wybranych rodziców.[/caption]
Po zdobyciu doświadczenia przy różnych fazach badań bank nasienny uznał, że roślina nie może być całkowicie zbadana aż do osiągnięcia dojrzałości, ale nie wszystkie fenotypy dojrzewają w tym samym okresie czasu, co czyni porównania nieprawidłowymi. Rzeczywiście w dniu 30 najlepszy osobnik w grupie może mieć przewagę na starcie, natomiast w dniu 60 nie musi być bezwzględnie najlepszy w tej samej grupie.
Opowiedziano nam o cennych doświadczeniach przy testowaniu proporcji różnych ekstraktów, czyli sprawdzaniu ich wpływu na różnych pacjentów, aby określić efekty każdej proporcji. Analizowano różne wyciągi CBD z konopi przemysłowych dostępne na rynku i odkryto, że niektóre z nich to produkty kiepskiej jakości o dużo niższej zawartości niż deklarowana na etykiecie.
Pobieranie męskich próbek.[/caption]
Dr Ananda powiedział: "W celu osiągnięcia konkretnych wyników ważne jest, aby przestrzegać dobrych praktyk od samego początku, od wzięcia próbek i przy całym procesie testowania". Podczas mojej wizyty zrozumiałem, co miał na myśli - przed rozpoczęciem pracy nałożyliśmy białe fartuchy i lateksowe rękawiczki. Najpierw wybiera się najbardziej interesujące rośliny i numeruje je, następnie bierzemy próbki bez dotykania kwiatów i wkładamy do słoików, kolejno ponumerowanych zarówno na boku, jak i na każdej pokrywie, aby zmniejszyć możliwość wystąpienia błędów.
Testy było kolejnym krokiem; tutaj dr Ananda przestrzega konkretnej metody, która została opisana w naszym artykule "Dzień zapylania". W międzyczasie jednak ta metoda została udoskonalona dzięki zastosowaniu niższych temperatur i mniejszej ilości materiałów (w celu uniknięcia zabrudzenia chromatografu). Aby skrócić długą opowieść, proces ten polega na suszeniu próbki w temp. 40º, ważeniu jej, rozpuszczaniu jej ultradźwiękami, odwirowywaniu, traktowaniu w piekarniku w celu dekarboksylacji, rozcieńczaniu w etanolu i umieszczeniu w kolumnie chromatograficznej. Każda analiza została powtórzona kilka razy w celu wykluczenia błędów. Wreszcie dr Ananda interpretuje wyniki na pececie i przygotowuje raporty dla poszczególnych grup.
Próbki do recyklingu w obszarze testowania.[/caption]
Chociaż Dinafem kontynuuje prace nad poprawą każdej linii, taki wybór rodziców daje Dinafem miejsce wśród wiodących banków nasion CBD.
Selekcja rodziców.[/caption]
Dinafem aktywnie wspierał ten projekt i opracował badania służące hodowli szczepów automatycznie kwitnących i dodatkowe testy tych szczepów. Zaczynano od podstaw, ponieważ wówczas stosowana metoda analityczna była błędna i trzeba było zaprojektować i zatwierdzić swój własny sposób. Wymagania wzrosły od pierwszych dni testów, ale udało się osiągnąć niezawodny stopień dokładności badania. Jak dr Ananda wyjaśnił: "Kiedy dostajemy nowe instrumenty badawcze, wbudowane oprogramowanie jest nieco ślepe, co oznacza, że trzeba dodać właściwe, zatwierdzone metody przetwarzania danych".
Zalety testów
Wkrótce wykazano, że hodowla i selekcja wspomagana przez chromatografię ostatecznie poprawia genetykę. Na przykład w ciągu trzech pokoleń zaobserwowaliśmy u automatów o początkowej 10% zawartości THC wzrost do 15% lub więcej. Gdy wyniki zostały potwierdzone, Dinafem postanowiło zdobyć więcej własnego sprzętu, aby zwiększyć liczbę i częstotliwość badań. Tak zaczęto pracę przy laboratorium we wrześniu 2014 roku, a w styczniu 2015 roku została ona już zakończona. Po doświadczeniach z wcześniej stosowanymi instrumentami dr. Ananda łatwiej było przygotować i zatwierdzić metody pomiaru, chociaż przy nowych materiałach "zawsze trzeba przeprowadzić kilka testów aż do pożądanego poziomu dokładności". Obecnie uważa stosowane testy za niezawodne do wyznaczonych celów i selekcje dokonane do tej pory zawsze przynosiły oczekiwane rezultaty. Początkowo odbywały się one przy hodowli automatów i opracowały Bubba Kush Autoflowering i OG Kush Autoflowering. Przy tych liniach wyniki były nieomylne; od pierwszej krzyżówki rozwijały się ciekawe fenotypy, które zawsze okazywały się sukcesem - na przykład puchar na ostatnich targach Expo Grow przypadł OG Kush Autoflowering, który okazał się najsilniejszym z zawodników, z 20% mocą przekroczoną w teście wykonanym przez niezależne laboratorium. Dr Ananda podkreśla, że "rośliny są stale testowane i konsekwentnie przyczynia się to do poprawy wielu linii, jako że można łatwo zidentyfikować najlepsze okazy". [caption id="attachment_3057" align="alignnone" width="500"] Rośliny o cechach hermafrodyty są odrzucane.[/caption]
Poza poziomami kannabinoidów testy przyczyniają się do lepszego zrozumienia genetyki. Na przykład dystrybucja chemotypów danego szczepu pomaga przy określeniu wyjściowego typu materiału, to znaczy czy jest to F1, F2 lub F3.
Innym aspektem, który warto podkreślić, jest znaczenie metody uprawowej i hodowcy, jako że można uzyskać z tej samej rośliny różne poziomy kannabinoidów. W szczególności można wykazać, że w kontrolowanym środowisku klimatycznym o wyższym natężeniu światła hodowca może uzyskać obfite plony i wyższe poziomy żywicy i kannabinoidów. Podobnie w zależności od zdolności rolnika poziom CBD może wzrastać lub zmniejszać się w danym zakresie.
Hodowla CBD wspomagana metodą chromatografii
Początkowo koncentrowała się na THC. CBD budził duże zainteresowanie, ale ledwo osiągał mierzalne wartości. Przy rutynowej analizie odkryto znaczny poziom CBD w jednej z amerykańskich linii genetycznych, z której stworzono Purple Orange CBD. Oczywiście doskonale zdawano sobie sprawę, że oprócz THC i CBD inne kannabinoidy musiały być wzięte pod uwagę i trzeba być gotowym na ich wykrycie w razie zaistnienia nadzwyczajnych poziomów. W rzeczywistości celem zawsze jest poprawa globalnej puli genetycznej. Powiedziano nam, że w ciągu ostatnich kilku lat dokonano wielu ważnych odkryć godnych zainteresowania i w niedalekiej przyszłości o wiele więcej specjalnych roślin będzie wprowadzanych na rynek. Kolejne lata będą charakteryzować badania nad wpływem "łączonym", który składa się z wpływu na efekt końcowy wszystkich kannabinoidów w różnych kombinacjach (terpenów i innych składników rośliny). Obecnie już powszechnie wiadomo, że wyniki uzyskane za pomocą ekstraktów całej rośliny są znacznie lepsze niż w przypadku stosowania pojedynczego kannabinoidu. [caption id="attachment_3058" align="alignnone" width="500"] Szczep bogaty w CBD należący do grupy czystych Indica.[/caption]
Po uzyskaniu całkowitej pewności co do testowania, hodowcy szybko ruszyli z projektem CBD, gdzie trzeba korzystać z możliwie najlepszych instrumentów, na dodatek intensywnie przez okres kilku miesięcy. Spędzono nawet dwa pełne tygodnie na ciągłych testach przy wyborze pierwszych rodziców ogromnych upraw. Próbki były przygotowywane w ciągu dnia, podczas gdy maszyna analizowała je w porze nocnej za pomocą zautomatyzowanego procesora próbek. Stwierdzono, że pomimo ograniczonego zestawu instrumentów były one wystarczająco skuteczne, aby spełnić wymagania Dinafem.
Jak dr Kush to ujął: "Istnieją banki nasion wykorzystujące Dinafemowy OG Kush Autoflowering do produkcji dobrej jakości automatów, więc korzystają z naszej pracy. Ale jeśli chodzi o CBD, jest długa droga przed nami i nie ma drogi na skróty. Doskonałość można osiągnąć jedynie poprzez badania i długie lata ciężkiej pracy, z pokolenia na pokolenie". Przed rozpoczęciem projektu znano teoretyczne podstawy hodowli - zwłaszcza hodowli CBD. Ale przemieszczano się przez różne etapy, od teorii do praktyki, i wykazano niezawodnym narzędziem chromatografu, że osiągnięto pożądane rezultaty. Ponieważ pracowano tylko z rodzajami chemotypów potrzebnymi w tym projekcie, można było przeprowadzić kilka selekcji i odrzucić duże liczby osobników, zaś używać tylko tych najlepszych. Pierwszym zadaniem było oddzielenie poszczególnych rodzajów chemotypów roślin o dominującym CBD, z różnymi stężeniami u różnych osobników. W czasie tego procesu wybrano rośliny o najwyższych poziomach kannabinoidów. Według powszechnej wiedzy badania są oczywiście tylko jedną stroną medalu; czasami test laboratoryjny odnajdzie chemotypy, które są pozornie bardzo podobne, ale różnice pojawiają się tylko w uprawie. Z tego samego powodu liczą się dane analityczne wraz z czynnikiem ludzkim; praca hodowców i ekspertów jest tym, na co ostatecznie Dinafem kładzie szczególny akcent.
Po przeanalizowaniu pełnej populacji następnym krokiem było rozrysowanie diagramów ukazujących dystrybucję. Jest to szczególnie przydatne w celu rozpoczęcia pracy z konkretnymi materiałami genetycznymi i ocenie, czy rośliny zachowują się zgodnie z oczekiwaniami. Normalnie to odwzorowanie jest wykorzystywane do usunięcia wszelkich grup roślin, które nie pasują do projektu. Obecnie ten krok staje się zbędny, ponieważ personel Dinafem posiada doskonałą wiedzę o materiałach genetycznych, z którymi pracuje i wie z góry, co będzie potrzebne w krzyżówce, aby bezpośrednio zmierzać do celu.
[caption id="attachment_3059" align="alignnone" width="500"] Numerowanie wybranych rodziców.[/caption]
Po zdobyciu doświadczenia przy różnych fazach badań bank nasienny uznał, że roślina nie może być całkowicie zbadana aż do osiągnięcia dojrzałości, ale nie wszystkie fenotypy dojrzewają w tym samym okresie czasu, co czyni porównania nieprawidłowymi. Rzeczywiście w dniu 30 najlepszy osobnik w grupie może mieć przewagę na starcie, natomiast w dniu 60 nie musi być bezwzględnie najlepszy w tej samej grupie.
Opowiedziano nam o cennych doświadczeniach przy testowaniu proporcji różnych ekstraktów, czyli sprawdzaniu ich wpływu na różnych pacjentów, aby określić efekty każdej proporcji. Analizowano różne wyciągi CBD z konopi przemysłowych dostępne na rynku i odkryto, że niektóre z nich to produkty kiepskiej jakości o dużo niższej zawartości niż deklarowana na etykiecie.
Pobieranie próbek, testy i selekcja
Po rozmowie w laboratorium z dr. Ananda poszedłem - z nim, dr. Kush i dr. O3 - odwiedzić jeden z obszarów do selekcji roślin. Tutaj widziałem ich w akcji podczas starannej selekcji wśród 250 roślin żeńskich i 100 męskich. Po pierwsze usunięto hermafrodyty, aby usunąć interseksualne cechy z puli genetycznej. Większość roślin CBD miało cechy Sativy, ale (jako że Dinafem zawsze szuka nowości) ostatecznie uprzywilejowane zostały cechy Indica i wybrano osobniki z dużymi liśćmi, średniej wielkości i o pysznym smaku, zaś odrzucono rośliny dążące do szczególnie dużych rozmiarów - co czasem może wydawać się intuicyjne. [caption id="attachment_3060" align="alignnone" width="500"] Pobieranie męskich próbek.[/caption]
Dr Ananda powiedział: "W celu osiągnięcia konkretnych wyników ważne jest, aby przestrzegać dobrych praktyk od samego początku, od wzięcia próbek i przy całym procesie testowania". Podczas mojej wizyty zrozumiałem, co miał na myśli - przed rozpoczęciem pracy nałożyliśmy białe fartuchy i lateksowe rękawiczki. Najpierw wybiera się najbardziej interesujące rośliny i numeruje je, następnie bierzemy próbki bez dotykania kwiatów i wkładamy do słoików, kolejno ponumerowanych zarówno na boku, jak i na każdej pokrywie, aby zmniejszyć możliwość wystąpienia błędów.
Testy było kolejnym krokiem; tutaj dr Ananda przestrzega konkretnej metody, która została opisana w naszym artykule "Dzień zapylania". W międzyczasie jednak ta metoda została udoskonalona dzięki zastosowaniu niższych temperatur i mniejszej ilości materiałów (w celu uniknięcia zabrudzenia chromatografu). Aby skrócić długą opowieść, proces ten polega na suszeniu próbki w temp. 40º, ważeniu jej, rozpuszczaniu jej ultradźwiękami, odwirowywaniu, traktowaniu w piekarniku w celu dekarboksylacji, rozcieńczaniu w etanolu i umieszczeniu w kolumnie chromatograficznej. Każda analiza została powtórzona kilka razy w celu wykluczenia błędów. Wreszcie dr Ananda interpretuje wyniki na pececie i przygotowuje raporty dla poszczególnych grup.
Rodzice o dominującym CBD
Odwiedziliśmy też obszar, w którym trzyma się najlepsze matki o dominującym CBD, z których tworzy się hybrydy CBD. Zamiast korzystać z tej samej rośliny o dominującym CBD z różnych szczepów, co doprowadzi do ich homogenizacji, Dinafem jest jednym z niewielu banków, które utrzymują szerokie grono różnych rodziców o dominującym CBD, zarówno rośliny męskie, jak i żeńskie, aby móc oddzielnie pracować nad każdą hybrydą. [caption id="attachment_3061" align="alignnone" width="500"] Próbki do recyklingu w obszarze testowania.[/caption]
Chociaż Dinafem kontynuuje prace nad poprawą każdej linii, taki wybór rodziców daje Dinafem miejsce wśród wiodących banków nasion CBD.
Wnioski
Szczepy CBD uprawiane są całkowicie jako forma rzemiosła. W przeszłości hodowcy zdawali się na mieszankę intuicji i szczęścia. "W tamtych czasach nie było prawie żadnych laboratoriów, które mogłyby im pomóc. Obecnie czynnik ludzki uzupełniają rozległe badania. Ta nowa hodowla 2.0 jest teraz szybkim dążeniem do doskonałości i plantatorzy będą mogli korzystać coraz bardziej i bardziej z szerokiej palety opcji – różniących się wielce i całkowicie ustabilizowanych”. Author: H. Madera
S
Soft Secrets
